为获得具有肾脏特异性的治疗性EVs，研究团队首先从人肾祖细胞（RPCs）中分离并纯化了EVs。采用超滤联合尺寸排阻色谱（SEC）的方法，EVs纯度显著提高，蛋白污染减少97%，颗粒浓度提升超过300%。纳米颗粒追踪分析（NTA）显示EVs平均粒径为157 nm，冷冻电镜（Cryo-EM）观察到典型的囊泡形态，且EVs特异性标志物CD9、CD63、CD81及Syntenin-1均呈阳性，而线粒体蛋白Cytochrome-C为阴性，排除了细胞污染。上述结果表明，该方法可获得较高纯度、结构完整的RPCs来源EVs。（图1）

随后，研究团队在体外缺氧模型中验证了RPCs来源EVs对肾小管上皮细胞（HK-2）的功能调控作用。结果显示，EVs处理可降低缺氧诱导的过度增殖（Ki67阳性细胞减少），下调损伤相关转录因子SOX9表达约40%，并降低活性氧（ROS）水平，提示EVs具有抗氧化应激和调节损伤-修复平衡的作用。而EVs对HK-2细胞的迁移能力无显著影响。（图2）

为实现EVs的局部、持续递送，研究团队制备了一种仅由脱细胞猪肾细胞外基质（DKECM）构成的生物墨水。组织学与DNA定量分析显示，脱细胞后细胞核被清除，残留DNA为22 ng/mg组织，低于免疫安全性阈值（50 ng/mg）。同时，不溶性胶原和糖胺聚糖（GAGs）等基质成分得以保留。流变学测试表明，该生物墨水具有剪切变稀、快速自愈合和温敏交联（37°C成胶）等特性，适用于后续3D生物打印。（图3）

在可打印性评估中，DKECM生物墨水在琼脂糖微粒支撑浴中打印出4层和8层结构，纤维均匀、孔隙连通，打印参数（压力、速度、填充密度）可调控。纤维宽度和横截面积随打印速度增加而减小，表现出可控的挤出行为。该结果说明DKECM生物墨水具备构建多层结构的能力。（图4）

最后，研究团队将荧光标记的EVs包载于DKECM生物墨水中进行打印，并评估其释放与摄取行为。结果显示，EVs在构建体中均匀分布，释放呈现两相特征：前48小时释放较快（约75%），随后进入持续缓慢释放阶段，至第14天基本完全释放。从构建体中释放出的EVs仍能被HK-2细胞摄取，定位于细胞核周区域，表明其结构完整性与生物活性得以保持。（图5）

在该研究中，作者构建了一种完全由肾脏脱细胞基质组成的生物墨水体系，用于肾祖细胞来源EVs的3D生物打印与持续递送，旨在促进肾脏修复。该生物墨水保留了肾脏特异性的基质成分，具备可打印性和控释能力。RPCs来源的EVs在体外能够缓解缺氧引起的过度增殖、氧化应激和损伤相关基因表达，且释放后的EVs仍能被靶细胞摄取。目前该研究仍处于体外阶段，后续需通过体内模型进一步验证其肾脏修复效果。未来，该平台有望拓展至其他器官的再生修复研究。