为探究hiPSC-NPCs的治疗潜力，研究团队首先验证了其分化潜能。体外实验显示，hiPSC-NPCs能够形成肾脏类器官，表达足细胞（PODXL⁺）、近端小管（LTL⁺）和远端小管（CDH1⁺）的标志物，表明其具备向肾单位各组分分化的能力。在此基础上，团队进一步评估了hiPSC-NPCs对AKI的治疗效果。将未诱导分化的hiPSC-NPCs移植至顺铂诱导的AKI小鼠肾被膜下，结果显示移植组小鼠血尿素氮（BUN）和血清肌酐（S-Cre）显著降低，肾小管坏死、管型形成等病理损伤减轻，生存率从对照组的31.7%提高至85%以上。相比之下，经过体外诱导分化2天的hiPSC-FS-NPCs移植后治疗效果较弱。这一结果表明，hiPSC-NPCs在不分化为肾脏类器官时可能具有更强的治疗潜力。

为实现hiPSC-NPCs的高效扩增，研究团队开发了CFY培养基（含CHIR99021、FGF9和Y-27632），并结合悬浮聚集体培养体系。结果显示，hiPSC-NPCs在CFY培养基中经两次传代后增殖超过100倍，OSR1、SIX2、PAX2等NPC标志物表达稳定维持，且传代后的细胞仍能分化为包含足细胞、近端小管和远端小管的肾单位类器官。该培养基适用于多个hiPSC系，具有良好的普适性。进一步将扩增后的hiPSC-NPCs（传代1次P1、传代2次P2）移植至AKI小鼠，结果显示P1和P2组均能有效改善肾功能、减轻组织损伤并提高生存率，且P2组疗效优于P1组，提示多次传代后的细胞仍保持治疗效果。

随后，研究团队进一步评估了hiPSC-NPCs对CKD的治疗效果。在马兜铃酸诱导的CKD小鼠模型中，将未诱导分化的hiPSC-NPCs移植至肾被膜下，结果显示移植组小鼠肾功能显著改善（BUN、S-Cre和尿蛋白水平降低），肾间质纤维化明显减轻（胶原沉积和肌成纤维细胞活化减少），且肾脏衰老得到有效延缓（SA-β-Gal活性及相关基因表达降低）。

为探究hiPSC-NPCs的作用机制，研究团队首先证实移植的细胞并未整合入宿主肾脏，提示其治疗作用依赖于旁分泌途径。在此基础上，团队构建了巨型细胞聚集体并收集其条件培养基（CM）。将CM腹腔注射至AKI小鼠，结果显示CM能显著改善肾功能、减轻肾小管损伤并提高生存率，且冷冻保存后的CM仍保留疗效。这一结果表明，hiPSC-NPCs通过分泌因子发挥治疗作用，而非依赖细胞整合，提示CM可作为“无细胞治疗”策略。

随后，为明确hiPSC-NPCs分泌的关键效应分子，研究团队通过RNA-seq分析发现hiPSC-NPCs高表达VEGF-A。将重组VEGF165蛋白局部缓释至AKI小鼠肾被膜下，结果显示VEGF-A能够增加肾微血管密度、减少凋亡细胞，从而改善肾功能。这些结果支持VEGF-A作为hiPSC-NPCs治疗AKI的关键机制之一。

最后，为验证VEGF-A在hiPSC-NPCs治疗中的关键作用，研究团队利用CRISPR-Cas9系统构建了VEGFA基因敲除的hiPSC-NPCs。将VEGFA KO hiPSC-NPCs分别移植至AKI和CKD小鼠模型，结果显示KO组在改善肾功能、减轻肾损伤和纤维化方面效果均显著降低，而野生型组则保持良好疗效。这些结果表明，VEGF-A在hiPSC-NPCs对AKI和CKD的治疗效果中起着关键作用。

在该研究中，作者揭示了hiPSC-NPCs治疗AKI和CKD的关键机制。具体而言，CFY培养基可实现hiPSC-NPCs超过100倍的高效扩增，c-MET可作为其特异性纯化标志物。hiPSC-NPCs通过分泌VEGF-A促进血管生成、减少细胞凋亡、抑制纤维化并延缓衰老，从而发挥多重保护作用。VEGFA基因敲除实验证实VEGF-A是该治疗策略的核心效应分子。此外，基于条件培养基的“无细胞疗法”可简化操作流程。未来，靶向VEGF-A信号通路、优化免疫兼容性（如HLA匹配iPSCs）以及探索CM成分的药理潜力，有望成为开发肾脏疾病新型治疗策略的重要方向。