研究团队首先通过时间序列分析明确了iPSC向肾脏细胞分化的动态过程（图1）。采用CHIR99021脉冲诱导后，在分化第0–6天连续取样进行qPCR和免疫荧光检测，结果显示细胞经历了一个典型的发育阶段转换：早期（第0–3天）首先上调中间中胚层标志物PAX2和OSR1；随后在第4–6天，肾后肾间充质相关标志物显著升高，包括肾间充质（SALL1、SIX1）、肾单位祖细胞（SIX2、ITGA8）以及肾间质祖细胞（PDGFRα）；而在第7天之后，上皮化及肾单位各节段分化标志物逐渐表达，提示细胞开始向成熟结构分化。RNA测序进一步证实，第7天细胞群体富集肾单位祖细胞和肾间质祖细胞特征。基于这一连续变化过程，研究团队确定第4–7天为关键“移植窗口期”，此时细胞处于诱导后肾间充质（iMM）阶段，兼具两类前体细胞特性，具有最佳的体内发育潜能。

在此基础上，研究团队比较了第7天的iMM与第15天成熟类器官的移植效果（图2），发现两者差异显著：将其分别移植至小鼠肾被膜下21天后，iMM组能够形成大量肾单位结构，包括足细胞（hPODXL⁺）和近端小管（LTL⁺）（约1.98和8.07个/mm²），而成熟类器官组则几乎完全无法形成这些结构（均为0）。进一步的时间动态分析显示，成熟类器官移植后仅3天即出现囊肿，随后肾小球和小管结构逐渐退化，尽管移植物体积增加，但属于无序增殖；相比之下，iMM移植后持续分化并维持稳定的肾单位结构，甚至在29天后仍保持完整。这表明，处于早期前体状态的iMM具有更强的可塑性和体内发育潜能，而过度分化的成熟类器官反而失去整合能力，提示肾脏再生存在一个关键的“最佳移植窗口期”。  

研究团队进一步解析了研究团队进一步解析了iMM在体内形成肾单位的细胞组成及其结构成熟度（图3）。免疫荧光结果显示，人源足细胞（hPODXL⁺）和壁层上皮细胞（PAX8⁺）包裹着宿主小鼠来源的血管内皮细胞（mCD31⁺），共同构建出一种“人-鼠嵌合”的肾小球结构；同时首次观察到GATA3⁺/HNA⁺人源系膜细胞分布于毛细血管袢之间并表达PDGFRB，提示iMM来源的肾间质祖细胞在体内成功分化并补全肾小球的关键组成部分。电镜进一步证实毛细血管内存在红细胞、足细胞与内皮之间形成基底膜并表达PV1，说明该结构已具备初步滤过功能；此外，第4天iMM同样可以形成分段的肾单位，且肾小管密度甚至高于第7天，但肾小球成熟度略低；同时qPCR显示FOXD1在第5天显著上调，进一步证明体系中存在并诱导了肾间质祖细胞的分化。

最后，研究团队比较了体外培养与体内移植对肾小管成熟度的影响（图4）。结果显示，与体外培养21天的类器官相比，移植到小鼠体内21天的iMM来源移植组织中，近端小管标记AQP1、髓袢标记UMOD和远端小管标记GATA3的表达均显著升高，说明体内环境明显促进了肾小管分化成熟。电镜进一步显示，这些肾小管具有丰富线粒体和完整的顶端结构，提示其已具备较强的物质转运能力；同时，宿主血管侵入并形成PV1⁺的周小管毛细血管网络，紧密环绕PAX8⁺肾小管，提供血供支持。此外，MEIS1⁺/PDGFRB⁺肾间质细胞分布在小管周围，形成类似体内的间质微环境。整体来看，这些结果表明，iMM在体内不仅能够形成结构完整的肾单位，还能实现体外类器官难以达到的成熟度和血管化水平。  

本研究表明，iPSC衍生肾脏细胞在不同分化阶段具有显著不同的体内发育潜能，其中第4–7天的诱导后肾间充质（iMM）为最佳移植窗口。该阶段细胞同时具备肾单位祖细胞和肾间质祖细胞特性，可在体内形成完整肾单位并招募宿主血管，实现较高成熟度；而成熟类器官移植后则发生退化，难以维持结构。上述结果提示，细胞分化阶段是影响体内整合与结构重建的关键因素。未来需进一步评估其功能修复效果并优化移植条件，同时提升组织成熟度与长期稳定性，为基于发育阶段调控的肾脏再生策略提供参考。